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粗脂肪是飼料中的重要營養(yǎng)素, 飼料中的粗脂肪含量是評價飼料質(zhì)量的標準之一。飼料脂肪的測定, 通常是將試樣放在特定.的儀器中, 用脂溶性溶劑(乙醚、氯仿、石油醚等)反復(fù)浸提試樣、稱量提取物的重量, 因在提取物中除脂肪外, 還有有機酸、磷脂、脂溶性維生素、葉綠素等, 所以提取物稱為粗脂肪或乙醚提取物。測定粗脂肪的方法很多, 本文就目前應(yīng)用較多的幾種方法進行分析, 比較其各自的優(yōu)缺點, 以為讀者選擇恰當測定方法提供一點幫助。

基本原理: 根據(jù)飼料中的油脂均可溶解于乙醚中, 故用無水乙醚反復(fù)浸提飼料中的脂肪, 使脂肪全部溶解于乙醚中, 然后將乙醚蒸發(fā), 瓶中所剩殘渣的重量即為飼料的粗脂肪含量。

1 油重法(或抽提瓶增重法)

1.1 原理

試樣在抽提管中反復(fù)抽提, 直到脂肪抽提干凈, 抽提瓶的增重即為樣品所含粗脂肪重量。

1.2 材料方法

索氏脂肪提取器、分析天平、電熱恒溫鼓風干燥箱、水浴鍋、乙醚等。索氏提取器應(yīng)干燥無水: 抽提瓶在105±2℃烘箱中烘干60min, 干燥器中冷卻30min, 再烘干30min, 同樣冷卻稱重, 兩次質(zhì)量之差小于0.0008g 為恒重。

稱取試樣1～5g(準確至0.0002g), 置于濾紙筒中或用濾紙包好, 濾紙包應(yīng)低于提取器虹吸管的高度, 并應(yīng)全部浸泡于乙醚中, 將濾紙包放人抽提管, 在抽提瓶中加無水乙醚, 在60～75℃的水浴加熱, 70 次為抽提終點[或以抽提管流出的乙醚揮發(fā)后不留下油跡為抽提終點]。

取出試樣, 仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶內(nèi)的乙醚被全部收完, 取下抽提瓶, 在水浴鍋上蒸除殘留乙醚。擦凈外壁, 將抽提瓶放人105±2℃烘箱中烘干120min, 燥器中冷卻30min, 稱重,再烘干30min, 同樣冷卻稱重, 兩次質(zhì)量差小于0.001g 為恒重, 抽提瓶前后重量之差為粗脂肪含量。

1.3 優(yōu)點

1.3.1 樣品含有的粗脂肪, 完全被抽提瓶回收,可以進一步分析樣品脂肪酸組成, 及脂肪酸品質(zhì)。

1.3.2 整個過程在樣品絕干狀態(tài)下進行, 實驗結(jié)果產(chǎn)生誤差的機會小。

1.4 缺點

1.4.1 長時間烘干, 抽提瓶會在恒重之后又增重, 主要原因是粗脂肪有可能在抽提瓶發(fā)生氧化反應(yīng)而使重量增加, 粗脂肪品質(zhì)發(fā)生變化。

1.4.2 抽提瓶重量、體積均較大, 在分析天平上稱量時有一定的困難。

1.4.3 實驗一次想進行多個樣品, 或做多組重復(fù)時, 需要的提取器相應(yīng)增多, 不利于同時進行, 在實驗性教學上不方便。

1.4.4 時間長, 危險大, 整個實驗完成大概要8h左右。乙醚有毒, 易揮發(fā), 大量吸入頭暈、眼酸、腹瀉。有些情況下還可能燃燒。

2 殘余法( 或濾紙包減重法)

2.1 原理

試樣在抽提管中反復(fù)抽提, 直到脂肪抽提干凈, 濾紙包的減重即為樣品所含粗脂肪重量。

2.2 材料方法

同上法前半部分取出試樣, 仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶內(nèi)的乙醚被全部收完, 將樣品包放入105±2℃烘箱中烘干120min, 燥器中冷卻30min, 稱重, 再烘干30min, 同樣冷卻稱重, 兩次質(zhì)量差小于0.001g 為恒重, 濾紙包前后重量之差為樣品粗脂肪含量。

2.3 優(yōu)點

2.3.1 一個抽提管可以盛多個樣品包(只需在樣包上用鉛筆做出標記即可), 有利于同時進行多個樣品, 或進行多組重復(fù)。適合教學實驗用。

2.3.2 濾紙包中的樣品經(jīng)過脫脂處理, 可以進行其他相關(guān)養(yǎng)分的分析測定, 省去再脫脂的步驟。

2.4 缺點

2.4.1 濾紙包在稱量過程中, 由于是絕干狀態(tài),很容易吸潮, 在分析天平上很難平衡。對實驗結(jié)果造成影響。

2.4.2 實驗不能進一步分析樣品中粗脂肪的品質(zhì)及組成, 因為不能清楚粗脂肪來源于哪個樣包, 哪種樣品。

2.4.3 同1.4.4。

3 濾袋技術(shù)測定粗脂肪

濾袋技術(shù)(Filter Bag Technology, FBT)用于批量分析飼料中的纖維含量的推廣, 使ANKOM Technology 在1993 年準確測定酸性洗滌纖維(Acid Detergent Fiber, ADF), 中性洗滌纖維(Neutral Detergent Fiber, XDF)和粗纖維(Crude-Fiber, CF)�；�于在纖維分析方面已獲得的經(jīng)驗,ANKOM Technology 新近又開發(fā)了一項快速批抽提脂肪技術(shù)(Accelerated Batch Extraction, ABE)、ANKOM XT20 脂肪分析儀是采用ANKOM 技術(shù)開發(fā)的一項使用普通溶劑快速抽提食品和飼料脂肪的新技術(shù)而研制成的。

3.1 原理

ABE 的原理十分簡單。樣品被分裝在一種用特殊材料制作的濾袋中, 在溶劑的作用下, 脂肪溶解透出濾袋, 而樣品基質(zhì)顆粒不能通過濾袋而留在濾袋中.從而實現(xiàn)脂肪與樣品基質(zhì)的分離。

3.2 材料方法

ANKOM X120 脂肪分析儀、XT20 濾袋、石油醚、封口機稱取1～3g 代表性樣品于已知重量的XT20 濾袋中, 封口。將盛有樣品的濾袋擺放在XT20 樣品架上。將XT20 樣品架放入分析儀的抽提缸中。按LID 按扭關(guān)閉抽提缸蓋。從操作控制臺(Operator Control Station, OCS)上選擇程序方式, 按“Auto Start”自動開始。一旦一個程序或者手動輸入設(shè)定被選中, 儀器會開始所有的所需步驟。當抽提過程完成后, XT20 一OCS 將顯示“Test Complete—Remove Sample.”(測試結(jié)束, 移去樣品)。將濾袋置于100℃條件下干燥1h, 并稱重。濾袋前后重量之差即為樣品粗脂肪含量。

3.3 優(yōu)點

3.3.1 高效, 一次能用不同的方式完成20 個樣品的抽提, 多數(shù)情況下, 30～50min 內(nèi)完成抽提, 適合要求準確、精密和快速的測定粗脂肪的實驗室采用。

3.3.2 安全, 使石油醚代替乙醚, 沸點升高, 每個操作環(huán)節(jié)都有安全保證裝置, 不易發(fā)生爆炸、燃燒。

3.4 缺點

該套儀器設(shè)備, 目前價格昂貴, 國內(nèi)只有少數(shù)科研院所有, 不易在大規(guī)模的飼料分析實驗中采用。

4 脂肪測定儀測

4.1 原理

仍然是經(jīng)典的索氏提取法, 但又將浸提過程分為高溫沸騰浸提和沖洗兩個步驟, 浸提時間大為縮短。

4.2 材料方法

ZF2001 型脂肪測定儀(配濾紙簡), 分析天平, 烘箱, 無水乙醚。根據(jù)樣品的脂肪含量, 準確稱取過40 目篩的樣品2～5g, 放入濾紙筒內(nèi), 烘干樣品, 把濾紙筒放到粗脂肪測定儀中。樣品提取杯中加人50mL 無水乙醚, 放到儀器的加熱板上。壓下連接手柄, 使提取杯與回流器密封連接, 接通冷凝水。將濾紙筒通過滑桿放人提取杯中, 打開電源, 5min 內(nèi)乙醚沸騰, 樣品進行高溫浸提, 提取1h 后, 拉動滑桿, 將濾紙筒從提取杯中提升出來, 用回流冷凝的乙醚淋洗樣品殘余的脂肪30min, 關(guān)閉淋洗閥門, 開始回收乙醚, 約5min 乙醚回收完畢, 取下提取杯, 在105℃烘干至恒重, 提取杯增重即為粗脂肪的含量。

4.3 優(yōu)點

4.3.1 脂肪測定儀測定的不同樣品所取得的結(jié)果來看, 其精密度、準確度都很好, 說明用脂肪測定儀測定的結(jié)果準確可靠。

4.3.2 用SZF-06C脂肪測定儀測定的速度快, 當天可完成整個測定過程, 取得測定結(jié)果, 并且可同時測定6個試樣。與經(jīng)典方法比較大大提高了效率、簡化了操作、降低了成本、節(jié)省了能源, 能較好地滿足日常生產(chǎn)和商貿(mào)交易工作中對脂肪含量測定的需要。