如何將茶葉中的農(nóng)藥進(jìn)行溶解提取
茶葉，可以說(shuō)是中國(guó)的一種象征，也是我國(guó)文明古國(guó)的一種代表，在我國(guó)外貿(mào)中獨(dú)占一角，不過(guò)隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，農(nóng)藥被發(fā)明以后，我國(guó)茶葉出口受到很大的阻礙，農(nóng)藥殘留超標(biāo)，根據(jù)有關(guān)部門(mén)研究，經(jīng)對(duì)其自行采集的18份茶葉樣品送交第三方檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，每種均含有至少3種農(nóng)藥茶殘留，其中12份茶葉樣本檢出違法違禁農(nóng)藥殘留。所以，對(duì)泡茶的過(guò)程中茶葉中農(nóng)藥溶出的研究就顯得十分重要。目前，針對(duì)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)主要分農(nóng)藥殘留速測(cè)儀法、氣相色譜法、氣相質(zhì)譜法、液相色譜法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法，本研究主要使用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)茶葉中可能含有的多種農(nóng)藥建立分析方法，建立泡茶模型，繪制殘留農(nóng)藥在水中溶出曲線，以期為茶葉中農(nóng)藥在水中狀態(tài)研究提供科學(xué)依據(jù)。
采用相關(guān)儀器進(jìn)行農(nóng)藥溶解情況研究，主要儀器有：高效液相色譜儀；三重四極桿/線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜儀；AE163型天平（0.1mg）；超純水設(shè)備；漩渦混合器；恒溫水浴振蕩器；超聲清洗儀；低溫高速離心機(jī)；微孔濾膜為0.22μm。阿特拉津、利谷隆、異丙甲草胺r、環(huán)嗪酮、敵草隆、去乙基莠去津l、綠麥��；乙腈、甲酸、水等（均為色譜純）；乙酸乙酯、環(huán)己烷（色譜純）。
我們?cè)谶M(jìn)行溶解茶葉農(nóng)藥的時(shí)候，一定要按照以下步驟進(jìn)行：準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品5mg乙腈溶解至5mL為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4%避光保存（有效期3個(gè)月）；取各標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液混合配制工作液，標(biāo)準(zhǔn)工作液使用體積分?jǐn)?shù)95%的乙腈水溶液稀釋至質(zhì)量濃度0.05，0.1，0.5，1.0，5.0，10.0ng/mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。取2g茶葉（精確至0.01g）加入50mL塑料離心管中，加入20mL水，渦動(dòng)0.5min，靜置30min，以轉(zhuǎn)速5000r/min離心5min，取上清液，為樣品提取液1。再次向離心管中加入20mL水，渦動(dòng)0.5min，靜置30min，以轉(zhuǎn)速5000r/min離心5min，取上清液，為樣品提取液2。重復(fù)操作，直至6次，分別標(biāo)記樣品提取液3—6。樣品提取液依次用正己烷—乙酸乙酯混合溶劑5mL（體積比為1∶1）液液萃取，取有機(jī)層。將有機(jī)層于40℃下氮?dú)獯蹈�，加�?.5mL的體積分?jǐn)?shù)95%的乙腈水溶液溶劑溶解。過(guò)0.22μm濾膜，待質(zhì)譜分析。柱溫：40℃；進(jìn)樣體積：10μL；流動(dòng)相：A為含0.1%甲酸的5%乙腈水溶液，B為含0.1%甲酸的95%乙腈水溶液；梯度洗脫。洗脫程序：初始時(shí)5%B維持1min，1~7min時(shí)5%B線性增加至70%，7.5min時(shí)B增加至95%，維持4.5min后0.5min線性遞減至5%，維持2.5min，整個(gè)分析過(guò)程15min；流速：250μL/min。多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）掃描模式，ESI離子源；CurtainGas流量為20mL/min，Gas1流量為50mL/min，Gas2流量為50mL/min，輔助加熱氣溫度為550℃，涉及氣體均為N2。7種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。
試驗(yàn)中色譜柱選擇C8柱，盡可能將色譜峰分離開(kāi)，所以初始流動(dòng)相中有機(jī)相的比例較低，使化合物保留在色譜柱上。試驗(yàn)表明，初始流動(dòng)相中乙腈相比例為5%，采用梯度洗脫程序，各化合物的峰型最優(yōu)。質(zhì)譜條件的優(yōu)化：母離子掃描模式找到7種化合物的母離子信號(hào)，子離子掃描采集對(duì)應(yīng)每種化合物的子離子全譜，選擇子離子全譜中豐度最高的2個(gè)子離子分別作為定性、定量離子。利用軟件自動(dòng)優(yōu)化去簇電壓、碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)，以及FIA自動(dòng)優(yōu)化離子源參數(shù)，得到最為理想的質(zhì)譜條件。7種農(nóng)藥MRM掃描模式下采集XIC色譜見(jiàn)圖1。方法的線性范圍、檢出限、定量下限及回收率利用MRM掃描模式對(duì)7種農(nóng)藥不同濃度工作曲線采集得到的離子對(duì)色譜峰進(jìn)行積分，在0.05~10ng/mL內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，所有化合物線性相關(guān)系數(shù)均>0.99。通過(guò)空白樣品中添加目標(biāo)化合物的方法，按樣品處理方法進(jìn)行處理和檢測(cè)，當(dāng)質(zhì)量濃度0.01ng/mL時(shí)信噪比均大于10（S/N，按照噪音3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算，下同）。由于實(shí)際樣品中基質(zhì)復(fù)雜程度不同，所以適當(dāng)放大檢出限LOD，認(rèn)定此時(shí)為方法的檢出限。同樣，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.05ng/mL時(shí)信噪比大于25，認(rèn)定此時(shí)為方法定量限。
本文針對(duì)含有7種農(nóng)藥的茶葉在水中溶解情況進(jìn)行研究，建立7種農(nóng)藥的檢測(cè)方法，得到檢出限低、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的試驗(yàn)方法。通過(guò)試驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集，證實(shí)泡茶過(guò)程中洗茶是非常重要且必不可少的步驟，有助于減少人們受到農(nóng)藥殘留的危害。
