谷類、豆類作物種子粗蛋白質(zhì)測定法(半微量凱氏法)
GB 2905—82
1 適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)適用于測定谷類、豆類作物種子粗蛋白質(zhì)含量。
2 儀器、設(shè)備
2.1 分析天平:感量0.0001克。
2.2 實驗室用粉碎機(jī)。
2.3 半微量凱氏蒸餾裝置(推薦使用龍科-A型半微量蒸餾裝置)。
2.4 半微量滴定管:容積10毫升。
2.5 硬質(zhì)凱氏燒瓶:容積25毫升,50毫升。
2.6 錐形瓶:容積150毫升。
2.7 電爐:600瓦。
3 試劑
3.1 鹽酸(GB 622—77)或硫酸(GB 625—77)。分析純。0.02 N、0.05 N標(biāo)準(zhǔn)溶液(鄰苯二甲酸氫鉀法標(biāo)定)。
3.2 氫氧化鈉(GB 629—77):工業(yè)用或化學(xué)純。40%溶液(W/V)。
3.3 硼酸-指示劑混合液。
3.3.1 硼酸(GB 628—78):分析純。2%溶液(W/V)。
3.3.2 混合指示劑:溴甲酚綠(HG 3—1220—79)0.5克,甲基紅(HG 3—958—76)0.11克,分別溶于95%乙醇中,混合后稀釋至100毫升。將混合指示劑與2%硼酸溶液按1∶100比例混合,用稀酸或堿調(diào)節(jié)pH值為4.5,使呈灰紫色。即為硼酸─指示劑混合液。
注:此溶液放置時間不宜過長,需在一個月之內(nèi)使用。
3.4 加速劑:五水合硫酸銅(GB 665—78)分析純,10克,硫酸鉀(HG 3—920—76)分析純,100克,在研缽中研磨,仔細(xì)混勻,過40目篩。
3.5 濃硫酸(GB 625—77)比重1.84,無氮。
3.6 30%過氧化氫(HG 3—1082—77):分析純。
3.7 30%過氧化氫-硫酸混合液(簡稱混液):30%過氧化氫、硫酸、水的比例為3∶2∶1,即在100毫升蒸餾水中慢慢加入200毫升濃硫酸,待冷卻后,將其加入300毫升30%過氧化氫,混勻。
注: |
此混液可一次配制500~1000毫升貯藏于試劑瓶中備用。夏天最好放入冰箱或蔭涼處貯藏,室溫(20℃)上、下時不必冷藏,貯藏時間不超過一個月。 |
3.8 蔗糖(HG 3—1001—76):分析純。
4 試樣的選取和制備
4.1 選取有代表性的種子(帶殼種子需脫殼)挑揀干凈,按四分法縮減取樣,取樣量不得少于20克。
4.2 將種子放于60~65℃烘箱中干燥8小時以上,用粉碎機(jī)磨碎,95%通過40目篩,裝入磨口瓶備用。
5 測定步驟
5.1 稱樣 稱取0.1克試樣兩份(含氮1~7毫克),準(zhǔn)確至0.0001克,同時測定試樣的水分含量。
5.2 消煮:
5.2.1 將試樣置于25毫升凱氏瓶中,加入加速劑粉末。除水稻為1克外,其他均為2克。然后加3毫升濃硫酸,輕輕搖動凱氏瓶,使試樣被硫酸濕潤,將凱氏瓶傾斜置于電爐上加熱,開始小火,待泡沫停止后加大火力,*保持凱氏瓶中的液體連續(xù)沸騰,沸酸在瓶頸中部冷凝回流。待溶液消煮到無微小的碳粒并呈透明的藍(lán)綠色時,谷類繼續(xù)消煮30分鐘,豆類繼續(xù)消煮60分鐘。
*應(yīng)加熱有硫酸部位的瓶底,不使瓶壁的溫度過高,以免銨鹽受熱分解造成氮的損失。
5.2.2 將試樣置于50毫升凱氏瓶中,加入0.5克加速劑和3毫升混液,在凱氏瓶上放一曲頸小漏斗、傾斜置于電爐上加熱,開始小火(用調(diào)壓器將電壓控制在175伏左右),保持凱氏瓶中液體呈微沸狀態(tài)。5分鐘后加大火力(將電壓控制在200伏左右),保持凱氏瓶中的液體連續(xù)沸騰。消煮總時間,水稻、高粱為30分鐘,其他均為45分鐘。
注:采用5.2.1或5.2.2消煮,其準(zhǔn)確度與精密度一致,可任取一種。
5.3 蒸餾、消煮液稍冷后加少量蒸餾水,輕振搖勻。移入半微量蒸餾裝置的反應(yīng)室中,用適量蒸餾水沖洗凱氏瓶4~5次。蒸餾時將冷凝管末端插到盛有10毫升硼酸-指示劑混合液的錐形瓶中,向反應(yīng)室中加入40%氫氧化鈉溶液15毫升**,然后通蒸氣蒸餾,當(dāng)餾出液體積約達(dá)50毫升時,降下錐形瓶,使冷凝管末端離開液面,繼續(xù)蒸餾1~2分鐘,用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均需流入錐形瓶中。
**采用消煮條件5.2.2時加10毫升即可。
5.4 滴定 谷類以0.02 N,豆類以0.05 N鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至錐形瓶內(nèi)的溶液由藍(lán)綠色變成灰紫色為終點。
5.5 空白 用0.1克蔗糖代替樣品作空白測定。消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不得超過0.3毫升。
6 測定結(jié)果的計算
6.1 計算公式
式中:V2── |
滴定試樣時消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(毫升); |
V1── | 滴定空白時消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(毫升); |
N── | 酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度,N; |
K── | 氮換算成粗蛋白質(zhì)的系數(shù); |
W── | 試樣重量(克); |
X── | 試樣水分含量; |
0.0140── |
每毫克當(dāng)量氮的克數(shù)。 |
6.2 平行測定的結(jié)果用算術(shù)平均值表示,保留小數(shù)后二位。
6.3 測定兩類作物種子粗蛋白質(zhì)的平行測定結(jié)果為15%以下時,其相對相差不得大于3%;15%~30%時為2%;30%以上時為1%。
6.4 結(jié)果報告中必須注明氮換算成粗蛋白質(zhì)的系數(shù)。換算系數(shù)見下表。
不同作物種子含氮量換算成粗蛋白質(zhì)之系數(shù)
種子 | 換算系數(shù) K |
麥類、豆類 水 稻 高 粱 大 豆 其他谷類 |
5.70 5.95 5.83 6.25 6.25 |
附 錄 A
參考資料
(參考件)
A.1 化學(xué)と生物,Vol 4,No2,1966年。
A.2 J.of AOAC,Vol 59,No 6,1976年。
A.3 International Assocition for Cereal Chemistry (ICC) Standard Nr.105。
A.4 International Standard ISO 1871。
A.5 AACC Method 46-10。
A.6 Fertilizer Abstracts,Vol 10,No 3,437,1977年。
附加說明:
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由中國農(nóng)科院分析室起草。