分光光度法和葉綠素計測定法之比較
分光光度法和葉綠素計測定法之比較
葉綠素含量的測定,歷來是實驗室的重點實驗之一,因為葉綠素含量的多少,可以直接現(xiàn)實植物的生長狀況,另外,葉綠素含量的參數(shù)SPAD,也能夠顯示土壤中氮肥的含量,指導(dǎo)土壤的施肥。通過便攜式葉綠素儀對植物葉綠素含量的評估,我們能夠節(jié)約20%的氮肥用量,也在一定程度上保護了環(huán)境。那么如何測定植物葉片的葉綠素含量呢?下面我們來介紹下分光光度法和葉綠素計法。
分光光度法:需要的儀器設(shè)備:分光光度計、電子頂載天平(感量0.01g)、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦境紙、滴管;試劑:96%乙醇(或80%丙酮);石英砂;碳酸鈣粉。具體方法如下:取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料,擦凈組織表面污物,剪碎(去掉中脈),混勻。2. 稱取剪碎的新鮮樣品0.2g,共3份,分別放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及2~3ml95%乙醇,研成均漿,再加乙醇10ml,繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3~5min。3. 取濾紙1張,置漏斗中,用乙醇濕潤,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,過濾到25ml棕色容量瓶中,用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數(shù)次,最后連同殘渣一起倒入漏斗中。4.用滴管吸取乙醇,將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。最后用乙醇定容至25ml,搖勻。5.把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95%乙醇為空白,在波長665nm、649nm下測定吸光度。然后根據(jù)相應(yīng)的公式,代入就可計算得到葉綠素的值。
葉綠素計法:葉綠素計測定植物葉片的綠色程度,相當(dāng)方便快捷,而且對葉片不會造成損害。你只許將葉片夾在儀器中間,然后按下儀器開關(guān),不出兩秒,就能夠得到葉片的SPAD值,即植物的葉綠素含量。因為測出的結(jié)果是用SPAD值表示,因此該款儀器又叫做SPAD502葉綠素儀,其中SPAD502為型號。SPAD502葉綠素儀大大節(jié)約了測定葉綠素含量的時間和步驟,為我們了解植物的生長狀況,以及提供施肥方案,帶來了極大的便利。而且用該儀器的精確度,并不比用分光光度法低,因此,在很多農(nóng)業(yè)部門、大專院校,都會選擇一款適合的葉綠素計,來測定植物的葉綠素含量,或者作為其他方法測出葉綠素含量值的參照。